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用。”李欣瑶郁闷了一下,“我在省里申请个课题,直接被否了,我怀疑人家都没仔细看。”

她这个年龄敢于申请课题的几乎都是博士学历,竞争相当激烈,年纪轻轻想出头哪有那么容易。之前她看的很开,但最近受了男友的刺激,又斗志昂扬的写了个申请课题递了上去,结果不出所料,心理大受打击。

所以萌生了退休躺平的念头。

“哎呦,你跟高风较什么劲啊,他优秀你高兴就完事了,哪能两个人都这么厉害啊,那样别人怎么活。”李妈劝女儿道。

“好好上你的班,有个工作多好,别人都羡慕不来呢。”李爸也教育道。

这边高风来到科研楼的时候,李友良、胡嘉然、程松、齐楠楠四人都在,由于刚分过钱,大家脸上的笑意怎么都掩藏不住。

特别是当齐楠楠和程松知道这只是第一笔款项后,说话的声音都有点发抖了。

齐楠楠今天面对小白鼠的时候都特别温柔,还仔仔细细的把笼子全都给擦了一遍,这会也不嫌臭了。

“两个事,一是我们需要注册一个公司,以后可能要经常跟别的企业打交道,很多事情公对公的话更方便一些。这个事友良负责跟进下,主要是先了解下大致的流程,免得到时候两眼一黑。”

“二是催化底物的事,齐惠仁今天下午给我打电话了,想要半个月内先送过去一批,他们着急用。”

“我在网上订购了一批仪器,这几天就能到,先送到友良家那里,整备好之后我先给他们合成一批发过去。”

这个事已经提前跟李友良商量好了,现在这个时候不适合在医院科研楼这边合成催化底物,要不然解释起来很麻烦。

而且合成这个催化底物的原料很简单,在哪都能买到,主要的设备就是几台温控仪加上离心机和色谱仪。

高风自掏腰包也没花几个钱,买的二手的设备,能用就行了。

几人商量了一下后,便又开始了之前的实验,在系统给具的实验流程中,单克隆抗体制备过程中的筛选被分为2步。

第一次筛选:

细胞融合后,杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的hat选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤(h)、氨基喋呤(a)和胸腺嘧啶核苷酸(t)。其依据是细胞中的dna合成有两条途径:

一条途径是生物合成途径(“d途径”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,为dna分子的合成提供原料。在此合成过程中,叶酸作为重要的辅酶参与这一过程,而hat培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物,可以阻断dna合成的“d途径”。

另一条途径是应急途径或补救途径(“s途径”),它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(hgprt)和胸腺嘧啶核苷激酶(tk)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸,两种酶缺一不可。因此,在hat培养液中,未融合的效应b细胞和两个效应b细胞融合的“d途径”被氨基喋呤阻断,虽“s途径”正常,但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般10d左右会死亡。

第二次筛选:

在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应b淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出再由这些单细胞克隆生长,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。

实验到了这一步基本上也到了收尾阶段,第一次筛选操作很简,难点在第二次筛选上:需要将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔的细胞培养板上,使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞(理论上30的孔中细胞数为0时,才能保证有些孔中是单个细胞)。

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